Les rôles passés, présents et futurs des tests d'amplification des graines d'α-synucléine

Date: Mai 2024
Auteurs: Omar El-Agnaf, PhD ; Ilham Abdi, PhD ; Nobutaka Hattori, MD, PhD, FANA ; Tiago Outeiro, PhD.
Rédacteurs: Dr Lorraine Kalia, Ph. D. ; Dr Daniela Berg, Ph. D. ; Dr Jeffery H. Kordower 

Introduction

Les tests d'amplification de séquences (TAS), également connus sous le nom de conversion induite par agitation en temps réel (RT-QuIC) ou d'amplification cyclique du repliement anormal des protéines (PMCA), ont été initialement développés pour la détection de la forme infectieuse de la protéine prion dans la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) ( Figure 1 ) ^.¹ Suite au succès des TAS comme test diagnostique de la MCJ, ^² ils ont été adaptés à la détection de l'α-synucléine (α-syn) associée à la maladie. Parmi les modifications apportées au protocole, on peut citer la diminution de l'acidité du tampon et de la température, l'une des plus importantes étant l'ajout de billes pendant l'agitation. Les tests d'amplification spécifique de l'α-synucléine (SAA) ont été les premiers à démontrer leur efficacité dans la détection d'agrégats d'α-synucléine chez des patients atteints de démence à corps de Lewy (DCL) et de maladie de Parkinson (MP) en 2016. Depuis, ce test a été reproduit dans le monde entier dans l'espoir d'améliorer sa sensibilité et sa spécificité pour la détection des synucléinopathies dans divers biofluides et tissus. En 2023, des chercheurs utilisant un SAA d'α-synucléine modifié ont été les premiers à rapporter une différenciation entre les patients atteints de MP et ceux atteints d'atrophie multisystématisée (AMS), ce qui représente une avancée prometteuse pour le développement de ces tests.⁹ La discussion ci-dessous approfondit l'état actuel des applications de l'α-synucléine, en s'appuyant sur l'expertise du domaine concernant les applications pratiques, les développements cruciaux et les perspectives d'avenir de ces tests.

Figure 1 : Chronologie historique du développement du test d’amplification des graines α-syn.

 

Aperçu de l'article Aller à:  Comment les SAA sont-ils réalisés en laboratoire et que mesurent-ils ? Quel biomatériau est actuellement considéré comme utile ?  Quel est le rôle actuel des AAS en pratique clinique ? Comment devraient-ils être appliqués aux personnes atteintes de trouble du comportement en sommeil paradoxal, aux personnes atteintes de la maladie de Parkinson et aux personnes atteintes de parkinsonisme diagnostiqué ? Quels sont les développements les plus prometteurs de cette méthodologie à l'horizon ? Que faut-il pour les réaliser ? Comment envisagez-vous les applications des SAA dans la pratique clinique et les essais cliniques futurs ? Références

 

Comment les SAA sont-ils réalisés en laboratoire et que mesurent-ils ? Quel biomatériau est actuellement considéré comme utile ? 

Professeur Outeiro :

Les SAA d'α-Syn sont réalisées en mélangeant du matériel d'origine humaine avec de l'α-syn monomérique recombinante (utilisée comme substrat), dans une plaque à 96 puits, sous agitation et à 37 °C. Actuellement, le liquide céphalo-rachidien (LCR) et le sang sont les biomatériaux considérés comme les plus utiles, mais d'autres biomatériaux tels que la salive, l'urine, les homogénats de peau, les écouvillons nasaux ou les selles pourraient également s'avérer utiles à l'avenir, à mesure que de nouvelles versions des protocoles émergent ( Figure 2 ).

Dr El-Agnaf et Dr Abdi :

Les protéinopathies impliquent l'agrégation pathologique de protéines mal repliées, qui peuvent servir de germes et favoriser le mauvais repliement et l'agrégation de ces mêmes protéines natives.^¹² Dans le cas des synucléinopathies, un type de protéinopathie, l'agrégation de la protéine α-synucléine est une caractéristique de la maladie. Il existe trois principaux types de synucléinopathies : la maladie de Parkinson (MP), la démence à corps de Lewy (DCL) et l'atrophie multisystématisée (AMS). Les deux premières sont principalement des synucléinopathies neuronales, tandis que la dernière est principalement une synucléinopathie oligodendrogliale.^¹³

Les SAA sont spécifiquement conçus pour détecter ces agrégats avec une sensibilité et une spécificité élevées. Ils exploitent ce mécanisme d'amorçage en mélangeant une petite quantité d'échantillon biologique contenant de l'α-synucléine mal repliée, ou « germes d'α-synucléine », avec un large excès de leur α-synucléine monomérique soluble.^¹⁴ Le processus d'amplification comprend des cycles d'incubation et d'agitation ou de sonication pour favoriser la multiplication rapide de ces germes. Cette interaction facilite l'amplification des agrégats de protéines mal repliées, permettant la détection de très faibles concentrations de protéines pathologiques. L'agrégation de l'α-synucléine est suivie au cours du temps, généralement en mesurant l'intensité de fluorescence d'un colorant, le Th-T, ajouté et se liant spécifiquement aux fibrilles amyloïdes formées, contenant des structures en feuillets β (les « agrégats »). L'augmentation de la fluorescence au cours du temps indique la formation d'agrégats d'α-synucléine. La cinétique de la réaction, reflétée par la courbe de croissance de l'intensité de fluorescence, peut fournir des informations sur le pouvoir d'amorçage des protéines mal repliées présentes dans l'échantillon biologique initial. ^3,15

Les travaux sur l'analyse d'activité de l'ADN (SAA) dans le cadre des synucléinopathies, en particulier la maladie de Parkinson, ont considérablement progressé au cours de la dernière décennie grâce au développement de SAA pour divers biomatériaux.^{^5,16} Le LCR est le biomatériau le plus fréquemment utilisé et le plus informatif en raison de son contact étroit avec le cerveau.^¹⁷ L'inclusion de divers biofluides et tissus dans les SAA a fait l'objet d'une attention particulière dans des études récentes, dont beaucoup ont étendu le champ d'application aux tissus de la muqueuse olfactive et de la peau, rapportant des résultats prometteurs qui soulignent l'adaptabilité du test et son potentiel pour améliorer la précision et la facilité du diagnostic. ^{^18,19} Des travaux plus récents ont exploré l'utilisation des SAA en intégrant une étape d'immunoprécipitation qui isole d'abord l'α-synucléine mal repliée du sang avant de l'appliquer au SAA.^⁹

Dr Hattori :

Il est utilisé pour le diagnostic précoce et le diagnostic différentiel de la maladie de Parkinson. Son utilisation la plus pertinente est axée sur les tests généraux, et nous estimons qu'il est important de le doser dans le sang. Le SAA a finalement « jeté les bases du diagnostic biologique de la maladie de Parkinson » et a permis de détecter la maladie avant même l'apparition de tout signe clinique ou physique.^{^9,21} Cependant, le prélèvement de LCR ou la biopsie cutanée sont plus contraignants que les méthodes de dépistage conventionnelles, et le développement de tests sanguins et d'autres méthodes moins invasives pourrait s'avérer nécessaire pour généraliser l'utilisation du SAA de l'α-synucléine comme marqueur de la maladie de Parkinson.

Figure 2 : Schéma du test d'amplification des graines α-syn. Créé avec Biorender.com.

 

Quel est le rôle actuel des AAS en pratique clinique ? Comment devraient-ils être appliqués aux personnes atteintes de trouble du comportement en sommeil paradoxal, aux personnes atteintes de la maladie de Parkinson et aux personnes atteintes de parkinsonisme diagnostiqué ?

Dr El-Agnaf et Dr Abdi :

Les anticorps anti-sécrétases (AAS) sont devenus des outils importants dans la recherche clinique sur la maladie de Parkinson et les troubles apparentés. Bien qu'ils soient très prometteurs en milieu de recherche, les AAS n'ont pas encore reçu l'approbation pour un usage diagnostique clinique. Cependant, la commercialisation du test de biomarqueurs SYNTap® aux États-Unis représente une avancée significative dans ce domaine. Ce test, développé par Amprion, pionnier de la technologie des AAS, constitue un progrès considérable dans le dépistage précoce de la maladie de Parkinson et des troubles apparentés. Bien qu'il ne soit pas encore universellement approuvé pour le diagnostic clinique, certains centres, comme la Mayo Clinic, ont commencé à intégrer le test SYNTap comme outil complémentaire dans leurs processus diagnostiques.^²⁰ Cette utilisation souligne la reconnaissance croissante du potentiel des AAS pour améliorer la compréhension clinique et la prise en charge des patients atteints de maladies neurodégénératives.

L'étude PPMI (Parkinson's Progression Markers Initiative) de Siderowf et al., étude de référence, se distingue comme la plus vaste analyse réalisée à ce jour utilisant la SAA, marquant une avancée significative dans notre compréhension de ses performances diagnostiques. Portant sur un échantillon de 1 123 participants, l'étude a démontré une sensibilité de 87.7 % et une spécificité de 96.3 % pour la maladie de Parkinson et a mis en évidence son rôle dans la compréhension de l'hétérogénéité moléculaire de la maladie et l'identification des personnes en phase prodromique.^²¹

Les agrégats d'alpha-synucléine (SAA) pourraient s'avérer particulièrement précieux pour la détection précoce des agrégats d'alpha-synucléine chez les personnes à risque de développer une synucléinopathie, comme celles atteintes de trouble du comportement en sommeil paradoxal (TCSP) ou d'hyposmie, comme l'ont démontré plusieurs études.^{^21-24} L'identification précoce de ces agrégats pourrait contribuer à la stratification des niveaux de risque de développer la maladie de Parkinson (MP) ou des troubles apparentés, facilitant ainsi un suivi plus étroit et des stratégies d'intervention précoce. L'étude PPMI a mis en évidence la capacité des SAA à distinguer la MP des sujets témoins sains et à affiner le diagnostic chez les personnes présentant des symptômes parkinsoniens, qu'elles soient porteuses ou non de variants génétiques associés à la MP. Les SAA permettent également de différencier la MP, la démence à corps de Lewy (DLB) et l'atrophie multisystématisée (AMS) des parkinsonismes non synucléiniques, tels que la paralysie supranucléaire progressive (PSP) et la dégénérescence corticobasale (DCB).^²⁵ Ceci contribue à un diagnostic précis et à une prise en charge appropriée de ces affections. Des recherches supplémentaires et une validation clinique au sein de cohortes plus importantes et diversifiées de patients atteints de maladies neurodégénératives sont nécessaires pour un diagnostic différentiel précis et pour comprendre la physiopathologie sous-jacente de la maladie. Cela permettrait d'intégrer les SAA dans la pratique clinique courante et de fournir des indications essentielles pour les décisions de traitement.

Professeur Outeiro :

Les SAA sont utiles pour déterminer la capacité d'ensemencement des individus. Selon des données récentes, il semble que les personnes atteintes de RBD présentent déjà un signal SAA positif, même si elles ne présentent pas de signes cliniques de la phase motrice de la maladie de Parkinson. Les SAA peuvent être très utiles pour classer les individus selon leur statut α-syn.

Dr Hattori :

Concernant les patients atteints de TCSP, il est généralement admis qu'ils constituent un groupe à risque de synucléinopathie. Il est donc important de vérifier le délai de survenue de la phénoconversion après un résultat positif en utilisant l'AAS associé à l'immunoprécipitation. Une fois cette vérification effectuée, le moment de l'intervention précoce sera déterminé. Nous pensons également que, chez les patients atteints de MP établie, il sera possible d'établir le lien entre les résultats de l'AAS et la vitesse de progression des symptômes cliniques. Ce test validé permet de différencier les syndromes parkinsoniens, qui ne sont pas des synucléinopathies. De plus, des essais cliniques ciblant uniquement la synucléinopathie seront réalisés, ce qui permettra de développer une médecine de précision.

AVERTISSEMENT IMPORTANT : Les SAA sont actuellement utilisés dans la recherche clinique et leur efficacité en tant qu’outil de diagnostic de la maladie de Parkinson à son stade prodromique n’a pas encore été validée. Veuillez consulter ces ressources pour obtenir plus d’informations sur les enjeux éthiques liés à l’utilisation des SAA en pratique clinique. Points de vue des patients sur les enjeux éthiques du dépistage précoce de la maladie de Parkinson. Schaeffer E, Rogge A, Nieding K, Helmker V, Letsch C, Hauptmann B, Berg D. Neurology. 12 mai 2020 ; 94(19) : e2037-e2044. doi : 10.1212/WNL.0000000000009400. Information sur les risques liés à la maladie de Parkinson prodromique. Schaeffer E, Toedt I, Köhler S, Rogge A, Berg D. Mov Disord. 2021 déc;36(12):2833-2839. doi: 10.1002/mds.28723.

 

Quels sont les développements les plus prometteurs de cette méthodologie à l'horizon ? Que faut-il pour les réaliser ?

Dr Hattori :

La différenciation au sein des synucléinopathies est désormais possible. Nous pensons qu'il est crucial de mettre au point une méthode de test plus simple, si possible. De plus, comme il existe des antigènes spécifiques à chaque synucléinopathie, nous pouvons affirmer que la production d'anticorps spécifiques à chaque maladie sera possible, ce qui permettra le développement de thérapies par anticorps spécifiques à chaque maladie. 

Dr El-Agnaf et Dr Abdi :

Les avantages des tests d'amplification spécifique (TAS) sont nombreux. Ils offrent une sensibilité supérieure à celle des autres méthodes diagnostiques et permettent de détecter les protéines mal repliées à des stades précoces de la maladie, contribuant ainsi à un diagnostic et une intervention plus précoces. ^{^19,26} L'applicabilité de cette technique à divers échantillons biologiques constitue également un atout précieux.^{^18,19,27} Cependant, malgré leur potentiel, les TAS présentent certaines limites. Ils ont principalement été utilisés de manière qualitative pour détecter la présence d'agrégats d'α-synucléine mal repliés, générant des résultats binaires (positif ou négatif) pour les « germes » d'α-synucléine. La quantification de ces germes dans les échantillons biologiques apporterait des informations précieuses et précises pour le diagnostic et le suivi des synucléinopathies. Afin de proposer une méthode plus directe de quantification des germes d'α-synucléine, notre équipe a récemment mis au point une nouvelle approche combinant TAS et dosage immunologique spécifique des agrégats. Cette approche permet une lecture directe et précise des résultats, démontrant ainsi la présence d'α-synucléine ensemencée dans des échantillons de LCR. ²⁸ Bien que cette approche ait permis de quantifier avec précision les produits SAA issus de la maladie de Parkinson et de la démence à corps de Lewy, avec une spécificité et une sensibilité élevées, le processus méthodologique dans son ensemble demeure complexe, car il nécessite la réalisation de deux analyses distinctes pour obtenir les résultats finaux. Le développement d'une approche plus simple, reposant sur le même principe, serait très avantageux.

L'idée d'intégrer un dosage immunologique à l'amplification spécifique d'agrégats (SAA) a été approfondie par notre équipe et d'autres. Dans nos travaux, nous avons repensé l'approche consistant à utiliser un dosage immunologique spécifique d'agrégats conjointement à la SAA, en développant un dosage unique qui amplifie efficacement les amorces d'α-synucléine et les quantifie simultanément (manuscrit soumis pour publication). Par ailleurs, différents tests diagnostiques, récemment mis au point par des chercheurs du Brigham and Women's Hospital et du Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering de l'Université Harvard, appelés dosages d'amplification numérique d'amorces (dSAA), fonctionnent en isolant des agrégats d'α-synucléine uniques dans des microcompartiments conçus à cet effet, puis en les faisant croître pour former des agrégats fluorescents plus grands, facilement détectables et quantifiables.^²²

Ces efforts visant à affiner les SAA pour en faire des outils non seulement qualitatifs, mais aussi quantitatifs, capables de mesurer avec précision la quantité d'agrégats protéiques spécifiques à une maladie, constituent des avancées prometteuses qui méritent d'être davantage soutenues. Leur validation à plus grande échelle pourrait marquer une étape importante dans leur intégration à la pratique clinique et aux essais cliniques, permettant ainsi un diagnostic précoce et précis, et, in fine, d'améliorer les résultats pour les patients. 

Professeur Outeiro :

L'augmentation de la sensibilité du test, la quantification des SAA et leur adaptation à des biomatériaux humains plus accessibles constitueraient des avancées importantes. Pour y parvenir, des recherches supplémentaires sont nécessaires afin d'identifier les conditions et les substrats de test susceptibles d'améliorer le test.   

 

Comment envisagez-vous les applications des SAA dans la pratique clinique et les essais cliniques futurs ? 

Professeur Outeiro :

J’imagine que le statut SAA sera déterminant pour classer les individus en vue d’essais cliniques et également, éventuellement, comme marqueur de l’engagement de la cible. 

Dr Hattori :

On peut dire que cette méthode peut être appliquée en premier lieu à la médecine de précision. L'examen physique permet également d'identifier les patients présentant un risque élevé de développer la maladie. Elle sera donc utile en médecine préventive. 

Dr El-Agnaf et Dr Abdi :

Suite au développement et à la validation d’une SAA quantitative, ses applications potentielles peuvent aboutir à des essais cliniques plus efficaces et au développement de stratégies de traitement personnalisées plus efficaces.    

Les SAA pourraient permettre de détecter la MP, la DCL et l'AMS avant l'apparition des symptômes cliniques, permettant ainsi d'intervenir à des stades où les traitements sont plus susceptibles d'être efficaces. Cette capacité de diagnostic précoce transformerait non seulement les stratégies de prise en charge des patients, mais affinerait également les critères de sélection des patients pour les essais cliniques, garantissant ainsi que les participants reçoivent un diagnostic précis et se trouvent au stade de progression de la maladie approprié pour que les traitements potentiels aient un impact maximal. De plus, en quantifiant les agrégats protéiques spécifiques à la maladie, les SAA pourraient servir de biomarqueurs pour suivre la progression de la maladie et la réponse au traitement, offrant ainsi un outil dynamique de suivi de l'état de santé des patients au fil du temps. Dans les essais cliniques, cela pourrait améliorer considérablement l'évaluation de l'efficacité thérapeutique, en fournissant des critères d'évaluation clairs et quantifiables reflétant l'évolution de la pathologie sous-jacente.

 

Références

1. Wilham, JM, Orrú, CD, Bessen, RA, Atarashi, R., Sano, K., Race, B., Meade-White, KD, Taubner, LM, Timmes, A., & Caughey, B. (2010). Quantification rapide en point final de l'activité d'ensemencement des prions avec une sensibilité comparable aux bio-essais. PLoS pathogens, 6(12), e1001217. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1001217 

2. Atarashi, R., Satoh, K., Sano, K., Fuse, T., Yamaguchi, N., Ishibashi, D., Matsubara, T., Nakagaki, T., Yamanaka, H., Shirabe, S., Yamada, M., Mizusawa, H., Kitamoto, T., Klug, G., McGlade, A., Collins, SJ et Nishida, N. (2011). Détection ultrasensible des prions humains dans le liquide céphalo-rachidien par conversion induite par un tremblement de terre en temps réel. Médecine naturelle, 17(2), 175-178. https://doi.org/10.1038/nm.2294

3. Fairfoul, G., McGuire, LI, Pal, S., Ironside, JW, Neumann, J., Christie, S., Joachim, C., Esiri, M., Evetts, SG, Rolinski, M., Baig, F., Ruffmann, C., Wade-Martins, R., Hu, MT, Parkkinen, L., et Green, AJ (2016). Dosage de l'alpha-synucléine par RT-QuIC dans le LCR de patients atteints d'alpha-synucléinopathies. Annals of clinical and translational neurology, 3(10), 812–818. https://doi.org/10.1002/acn3.338

4. Bongianni, M., Ladogana, A., Capaldi, S., Klotz, S., Baiardi, S., Cagnin, A., Perra, D., Fiorini, M., Poleggi, A., Legname, G., Cattaruzza, T., Janes, F., Tabaton, M., Ghetti, B., Monaco, S., Kovacs, GG, Parchi, P., Pocchiari, M. et Zanusso, G. (2019). Test d'α-Synucléine RT-QuIC dans le liquide céphalo-rachidien de patients atteints de démence à corps de Lewy. Annales de neurologie clinique et translationnelle, 6(10), 2120-2126. https://doi.org/10.1002/acn3.50897

5. Rossi, M., Candelise, N., Baiardi, S., Capellari, S., Giannini, G., Orrù, CD, Antelmi, E., Mammana, A., Hughson, AG, Calandra-Buonaura, G., Ladogana, A., Plazzi, G., Cortelli, P., Caughey, B. et Parchi, P. (2020). Test RT-QuIC ultrasensible avec une sensibilité et une spécificité élevées pour les synucléinopathies associées à corps de Lewy. Acta neuropathologique, 140(1), 49-62. https://doi.org/10.1007/s00401-020-02160-8

6. Brockmann, K., Quadalti, C., Lerche, S., Rossi, M., Wurster, I., Baiardi, S., Roeben, B., Mammana, A., Zimmermann, M., Hauser, AK, Deuschle, C., Schulte, C., Waniek, K., Lachmann, I., Sjödin, S., Brinkmalm, A., Blennow, K., Zetterberg, H., Gasser, T., et Parchi, P. (2021). Association entre l'activité d'ensemencement de l'alpha-synucléine dans le LCR et le statut génétique dans la maladie de Parkinson et la démence à corps de Lewy. Acta neuropathologica communications, 9(1), 175. https://doi.org/10.1186/s40478-021-01276-6

7. Poggiolini, I., Gupta, V., Lawton, M., Lee, S., El-Turabi, A., Querejeta-Coma, A., Trenkwalder, C., Sixel-Döring, F., Foubert-Samier, A., Pavy-Le Traon, A., Plazzi, G., Biscarini, F., Montplaisir, J., Gagnon, JF, Postuma, RB, Antelmi, E., Meissner, WG, Mollenhauer, B., Ben-Shlomo, Y., Hu, MT,… Parkkinen, L. (2022). Valeur diagnostique de la quantification des graines d'alpha-synucléine du liquide céphalorachidien dans les synucléinopathies. Brain : un journal de neurologie, 145(2), 584-595. https://doi.org/10.1093/brain/awab431

8. Kluge, A., Bunk, J., Schaeffer, E., Drobny, A., Xiang, W., Knacke, H., Bub, S., Lückstädt, W., Arnold, P., Lucius, R., Berg, D., et Zunke, F. (2022). Détection d'α-synucléine pathologique dérivée des neurones dans le sang. Cerveau : une revue de neurologie, 145(9), 3058–3071. https://doi.org/10.1093/brain/awac115 

9. Okuzumi, A., Hatano, T., Matsumoto, G., Nojiri, S., Ueno, SI, Imamichi-Tatano, Y., Kimura, H., Kakuta, S., Kondo, A., Fukuhara, T., Li, Y., Funayama, M., Saiki, S., Taniguchi, D., Tsunemi, T., McIntyre, D., Gérardy, JJ, Mittelbronn, M., Kruger, R., Uchiyama, Y.,… Hattori, N. (2023). Graines d'α-synucléine propagatives comme biomarqueurs sériques des synucléinopathies. Médecine naturelle, 29(6), 1448-1455. https://doi.org/10.1038/s41591-023-02358-9

10. Simuni, T., Chahine, LM, Poston, K., Brumm, M., Buracchio, T., Campbell, M., Chowdhury, S., Coffey, C., Concha-Marambio, L., Dam, T., DiBiaso, P., Foroud, T., Frasier, M., Gochanour, C., Jennings, D., Kieburtz, K., Kopil, CM, Merchant, K., Mollenhauer, B., Montine, T., … Marek, K. (2024). Définition biologique de la maladie à α-synucléine neuronale : vers un système de stadification intégré pour la recherche. The Lancet Neurology, 23(2), 178–190. https://doi.org/10.1016/S1474-4422(23)00405-2

11. Höglinger, GU, Adler, CH, Berg, D., Klein, C., Outeiro, TF, Poewe, W., Postuma, R., Stoessl, AJ, et Lang, AE (2024). Classification biologique de la maladie de Parkinson : critères diagnostiques de recherche SynNeurGe. The Lancet. Neurologie, 23(2), 191–204. https://doi.org/10.1016/S1474-4422(23)00404-0 

12. Bayer TA. Les protéinopathies, un concept essentiel pour comprendre et traiter les maladies dégénératives ? ​​Eur Neuropsychopharmacol [Internet]. 2015er mai 1 [cité le 2024 février 18] ; 25(5) : 713–24. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23642796/ 

13. McCann H, Stevens CH, Cartwright H, Halliday GM. Phénotypes d'α-synucléinopathie. Parkinsonism Relat Disord. 2014er janvier 1 ; 20(SUPPL.1) : S62–7. 

14. Concha-Marambio L, Pritzkow S, Shahnawaz M, Farris CM, Soto C. Test d'amplification des graines pour la détection d'agrégats pathologiques d'alpha-synucléine dans le liquide céphalorachidien. Nature Protocols 2023 18:4 [Internet]. 2023 janvier 18 [cité le 2023 novembre 12] ; 18(4) : 1179–96. Disponible sur : https://www.nature.com/articles/s41596-022-00787-3 

15. Shahnawaz M, Tokuda T, Waraga M, Mendez N, Ishii R, Trenkwalder C, et al. Développement d'un diagnostic biochimique de la maladie de Parkinson par détection d'agrégats d'α-synucléine mal repliés dans le liquide céphalorachidien. JAMA Neurol [Internet]. 2017er février 1 [cité le 2023 septembre 24] ; 74(2) : 163–72. Disponible sur : https://jamanetwork.com/journals/jamaneurology/fullarticle/2588684 

16. Shahnawaz M, Mukherjee A, Pritzkow S, Mendez N, Rabadia P, Liu X, et al. Discrimination des souches d'α-synucléine dans la maladie de Parkinson et l'atrophie multisystématisée. Nature [Internet]. 2020 février 13 [cité le 2023 novembre 23] ; 578(7794) : 273–7. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32025029/ 

17. El-Agnaf OMA, Salem SA, Paleologou KE, Cooper LJ, Fullwood NJ, Gibson MJ, et al. L'α-synucléine impliquée dans la maladie de Parkinson est présente dans les fluides biologiques extracellulaires, dont le plasma humain. The FASEB Journal [Internet]. 2003er octobre 1 [cité le 2024 février 18] ; 17(13) : 1–16. Disponible sur : https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1096/fj.03-0098fje 

18. Kuzkina A, Bargar C, Schmitt D, Rößle J, Wang W, Schubert AL, et al. Valeur diagnostique de la RT-QuIC cutanée dans la maladie de Parkinson : une étude menée en deux laboratoires. npj Parkinson's Disease 2021 7:1 [Internet]. 2021 novembre 15 [cité le 2023 novembre 22] ; 7(1):1–11. Disponible sur : https://www.nature.com/articles/s41531-021-00242-2 

19. De Luca CMG, Elia AE, Portaleone SM, Cazzaniga FA, Rossi M, Bistaffa E, et al. Activité efficace d'ensemencement de l'α-synucléine par RT-QuIC dans des échantillons de muqueuse olfactive de patients atteints de la maladie de Parkinson et d'atrophie multisystématisée. Transl Neurodegener [Internet]. 2019 août 8 [cité le 2023 novembre 22] ; 8(1) : 1–14. Disponible sur : https://translationalneurodegeneration.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40035-019-0164-x 

20. Clinique Mayo. Test de dépistage de la maladie de Parkinson (test d'amplification des graines d'alpha-synucléine) - Clinique Mayo [Internet]. 2023 [cité le 2024 février 18]. Disponible sur : https://www.mayoclinic.org/tests-procedures/parkinsons-testing-alpha-synuclein-seed-amplification/about/pac-20556191 

21. Siderowf A, Concha-Marambio L, Lafontant DE, Farris CM, Ma Y, Urenia PA, Nguyen H, Alcalay RN, Chahine LM, Foroud T, Galasko D, Kieburtz K, Merchant K, Mollenhauer B, Poston KL, Seibyl J, Simuni T, Tanner CM, Weintraub D, Videnovic A, Choi SH, Kurth R, Caspell-Garcia C, Coffey CS, Frasier M, Oliveira LMA, Hutten SJ, Sherer T, Marek K, Soto C; Initiative sur les marqueurs de progression de la maladie de Parkinson. Évaluation de l'hétérogénéité parmi les participants de la cohorte de l'Initiative sur les marqueurs de progression de la maladie de Parkinson à l'aide de l'amplification des graines d'α-synucléine : une étude transversale. Lancet Neurol. Mai 2023 ; 22(5) : 407-417. doi: 10.1016/S1474-4422(23)00109-6. PMID: 37059509; PMCID: PMC10627170. 

22. Gilboa T, Swank Z, Thakur R, Gould RA, Ooi KH, Norman M, et al. Vers la quantification des agrégats d'α-synucléine par amplification numérique des semences. Proc Natl Acad Sci USA [Internet]. 2024 janvier 16 [cité le 2024 février 18] ; 121(3). Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38194461/ 

23. Postuma RB. Maladie de Parkinson prodromique – Utilisation du trouble du comportement en sommeil paradoxal comme fenêtre. Parkinsonism Relat Disord. 2014er janvier 1 ; 20(SUPPL.1) : S1–4. 

24. Concha-Marambio L, Weber S, Farris CM, Dakna M, Lang E, Wicke T, et al. Détection précise des grains d'α-synucléine dans le liquide céphalorachidien à partir de cas isolés de troubles du comportement du sommeil à mouvements oculaires rapides et de patients atteints de la maladie de Parkinson dans la cohorte DeNovo Parkinson (DeNoPa). Mov Disord [Internet]. 2023er avril 1 [cité le 2024 février 18] ; 38(4) : 567–78. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36781413/ 

25. Fernandes Gomes B, Farris CM, Ma Y, Concha-Marambio L, Lebovitz R, Nellgård B, et al. Test d'amplification des graines d'α-synucléine comme outil de diagnostic des troubles parkinsoniens. Parkinsonism Relat Disord [Internet]. 2023er décembre 1 [cité le 2024 février 19] ; 117. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37591709/ 

26. Iranzo A, Fairfoul G, Ayudhaya ACN, Serradell M, Gelpi E, Vilaseca I, et al. Détection de l'α-synucléine dans le LCR par RT-QuIC chez des patients présentant un trouble isolé du sommeil paradoxal : une étude observationnelle longitudinale. Lancet Neurol [Internet]. 2021er mars 1 [cité le 2023 septembre 24] ; 20(3) : 203–12. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33609478/ 

27. Manne S, Kondru N, Jin H, Anantharam V, Huang X, Kanthasamy A, et al. Conversion induite par tremblements en temps réel de l'α-synucléine dans les glandes sous-maxillaires des patients atteints de la maladie de Parkinson. Mov Disord [Internet]. 2020er février 1 [cité le 2023 novembre 22] ; 35(2) : 268–78. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31758740/ 

28. Majbour N, Aasly J, Abdi I, Ghanem S, Erskine D, Van De Berg W, et al. Agrégats d'α-synucléine associés à la maladie comme biomarqueurs du stade clinique de la maladie de Parkinson. Neurology [Internet]. 2022 novembre 22 [cité le 2023 juin 11] ; 99(21) : E2417–27. Disponible sur : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36096686/